cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管
用于采集全血以及保存循环游离 DNA 和 RNA
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cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管
用于采集全血以及保存循环游离 DNA 和 RNA
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图 1.环境温度储存对 cf-DNA (pDNA) 和基因组 DNA (gDNA) 的影响,前者以短 Alu(115bp)片段为例,后者以大 Alu(247bp)片段为例。抽取的血液样本分为两种:1) EDTA 管,2) 竞争对手试管或 3) Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管,室温保存。在指定时间抽取等量血液并分离血浆。分离出 DNA,使用代表 pDNA 的短 ALU 基因靶标(115 bp)和代表 gDNA 的长 ALU 基因(247 bp),通过实时聚合酶链式反应 测定 pDNA 和 gDNA 的浓度。这两个片段的水平应在持续时间内保持不变,表明病情稳定,不会发生溶血。不出所料,在 EDTA 管中,cf-DNA 没有稳定,而且出现了大量溶血。14 天后,竞争产品显示这两种基因的 Ct 值明显降低,而 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在室温下可稳定保存 30 天。
图 2.运输后血浆容量不会损失。从 6 名不同的献血者身上抽血,一式两份。一套保存在室温下的实验室中,另一套装在保温箱中,通过隔夜空运从安大略省索罗尔德市运往密歇根州温尼伯市,然后再运回安大略省索罗尔德市(经过 72 小时)。回国后,保存的样本在室温下存放 7 天,然后再分离血浆。从 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中回收的血浆量在运输前和运输后都没有变化(6-7 mL 回收血浆)。对于竞争对手试管和 EDTA 试管,运输前回收的血浆量约为 4 mL,运输后回收的血浆量约为 2.5 mL。
图 3.随时间测量采集血液的溶血情况。血液样本被抽取到1) EDTA 管;2) 竞争对手试管;3) Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管,并可保存 30 天。溶血是通过测量 3 名受试者血浆中游离血红蛋白在 414 nm 波长下的吸收率来确定的。显示的是平均吸收率。EDTA 管和竞争对手试管中的游离血红蛋白量每增加一天就会迅速增加,而 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中的游离血红蛋白量则保持相对稳定。
图 4.防止细胞裂解、gDNA 释放和血浆中凋亡梯的积累。将抽取的血样放入三种不同的试管(Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管、EDTA 和竞争对手试管)中,并保存长达 30 天。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管有助于防止高分子量 gDNA 释放到血浆中,同时最大限度地减少外周血白细胞凋亡产生的污染性凋亡梯的积累。如黑色圆圈所示,与竞争对手试管和 EDTA 试管相比,gDNA 污染水平非常低。这表明细胞裂解程度很低,随后 gDNA 释放到保存的血浆样本中。
图 5.高温(37°C)储存 8 天的影响。将血样抽取到 EDTA 管、竞争对手管或 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管中并储存在 37°C 下。然后从处理后的血浆中分离出 cf-DNA。使用长 ALU 基因靶标 (247 bp) 通过实时聚合酶链式反应 测定 gDNA 浓度。EDTA 管中的 gDNA - 目标物在 37°C 下储存 1 天后,Ct.值较初始时间点明显下降,并持续下降至第 8 天。对于竞争对手,gDNA - 目标物在储存第 4 天前保持稳定,然后 Ct 值开始显著下降,表明第 4 天后稳定性较差。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管可使样本稳定 8 天。
图 6.使用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管保存血浆中的大量 cf-DNA。将同一供血者的血液样本抽入竞争对手试管或 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中,并在室温下保存 7 天。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管回收了 6.5 mL 血浆,而竞争对手的试管回收了 3.5 mL 血浆。然后使用 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒(类别号:55600)和 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒(类别号:55800)。使用安捷伦生物分析仪高灵敏度 DNA 芯片对从两种样本中回收的 DNA 数量进行了评估。从生物分析仪的检测结果可以看出,与从竞争对手的保存剂试管中回收的 cf-DNA 相比,Norgen 的保存剂试管产生了更多的 cf-DNA(蓝色峰值)。
图 7.环境温度储存对 cf-RNA 的影响,以 18S rRNA 转录本、HPRT1 mRNA 转录本和 miR-21 为例。抽取的血液样本分为两种:1) 竞争对手试管或 2) Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管。竞争对手的试管在室温下可保存 14 天,而 Norgens cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在室温下可保存 30 天。在指定时间处理每个试管并分离血浆。分离出 Cf-RNA,并通过针对 18S rRNA 转录本、HPRT1 mRNA 转录本和 miR-21 的 rt-qPCR 扩增测定纯化的 cf-RNA 的稳定性。这三个目标的水平应在稳定期间保持不变。7 天后,竞争对手的三个靶标的 Ct 值明显升高,表明 cf-RNA 降解,而 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在室温条件下,cf-RNA 可稳定 30 天。
图 8.环境温度储存对血浆蛋白保存 30 天的影响。血液样本被抽入 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中,并在室温下保存 30 天。在指定的时间,对每个管进行血浆回收处理,并使用 Norgens ProteoSpin™ 丰富血清蛋白去除试剂盒(类别号:17300)从 50 µL 血浆中纯化蛋白质。在 12% SDS-PAGE 凝胶上对纯化的 A) 贫血血浆蛋白和 B) 高丰度血浆蛋白的稳定性进行了评估。在环境温度下,耗竭的血浆蛋白和高含量的血浆蛋白都能稳定地保存 30 天,没有任何蛋白质降解的迹象。
试剂盒规格
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管径
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16 x 100 毫米
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管型 | PET 管 |
抽血量
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8.7 ml 管装 10 ml
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保存剂容量 |
1.3 mL
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回收血浆量 | 约 6-7 ml (不受运输影响) |
抗凝剂 |
专利
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保存剂 |
无甲醛 - 专有保存
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cf-DNA 保存期限 |
室温(15-25°C)下长达 30 天,
37°C 下长达 8 天 |
cf-RNA 保存期限 |
室温(15-25°C)下长达 30 天
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四氯化碳保存期 |
室温(15-25°C)下长达 14 天
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储存条件和产品稳定性
- 未灌装的 Norgen cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在 15-30°C 下储存时,可在有效期内保持稳定。有效期见软管标签。
- 对于未灌装的 Norgen cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管,可在 -20°C 至 37°C 下短期储存/运输 10 天。
- 请勿将未灌装的 Norgen cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管冷冻保存超过 10 天。冷冻未填充的试管可能会导致真空度下降,并可能出现沉淀。
- 用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管采集的血液样本中的无细胞 DNA 在室温(15-25°C)下可稳定保存 30 天。
- 用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管采集的血液样本中的无细胞 DNA 在 37ºC 温度下可稳定保存 8 天。
- 用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管采集的血液样本中的无细胞 RNA 在室温(15-25°C)下可稳定保存 30 天。
- 用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管采集的血液样本中的循环肿瘤细胞 (CTC) 在室温(15-25ºC)下可稳定保存 14 天。