Kits de purification de l'ADN circulant exempt de cellules du plasma/sérum
Pour une purification rapide et simple de l'ADN circulant exempt de cellules à partir d'échantillons de plasma/sérum
Kits de purification de l'ADN circulant exempt de cellules du plasma/sérum
Pour une purification rapide et simple de l'ADN circulant exempt de cellules à partir d'échantillons de plasma/sérum
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Aperçu du produit
Ces kits constituent une méthode rapide, fiable et pratique d'isolement de l'ADN circulant libre de cellules (ADN-cfc) de haute qualité, de grande pureté et sans inhibiteur, à partir de volumes d'échantillons de plasma/sérum. L'ADN-cfc purifié du plasma/sérum est entièrement compatible avec toutes les applications en aval, y compris la PCR, la qPCR, la PCR sensible à la méthylation et l'analyse par transfert de Southern, les microréseaux et la NGS.
Contexte
L'ADN circulant libre de cellules dans le plasma/sérum (ADN-cfc) a le potentiel de fournir des biomarqueurs pour certains cancers et états pathologiques ainsi que l'ADN fœtal dans le sang maternel. Actuellement, des progrès significatifs sont réalisés dans l'utilisation de l'ADN-cfc comme biomarqueurs pour le diagnostic précoce, le pronostic et le suivi de la thérapie pour plusieurs types de cancer et de maladies auto-immunes. L'ADN mitochondrial acellulaire (ADN-cfmt) fait également l'objet d'études pour déterminer son importance clinique. Cet ADN-cfc est généralement présent sous forme de courts fragments de moins de 1000 pb. En outre, l'ADN fœtal acellulaire a été largement utilisé comme méthode non invasive de diagnostic prénatal, notamment pour l'identification précoce du sexe du fœtus, les études génétiques pour les familles présentant un risque élevé de troubles génétiques héréditaires, le dépistage du facteur Rhésus, le dépistage de l'aneuploïdie et l'identification de la prééclampsie.
Kit micro de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum
Idéal pour manipuler des volumes initiaux de plasma/sérum allant de 10 μL à 200 μL. Le kit est conçu pour isoler toutes les tailles d’ADN-cfc à partir d'échantillons de plasma/sérum frais ou congelés et l'ADN purifié est élué dans un volume d'élution flexible allant de 25 µL à 50 µL.
Kit mini de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum
Idéal pour manipuler des volumes initiaux de plasma/sérum allant de 200 μL à 500 μL. Le kit est conçu pour isoler toutes les tailles d’ADN-cfc à partir d'échantillons de plasma/sérum frais ou congelés et l'ADN purifié est élué dans un volume d'élution flexible allant de 25 µL à 50 µL.
Kit Midi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum
Idéal pour manipuler des volumes initiaux de plasma/sérum allant de 1 ml à 4 ml. La première colonne traitera le grand volume de fluides corporels qui sera suivi d'une concentration sur une mini-colonne pour une élution finale de 25 µL à 50 µL.
Kit Maxi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum
Idéal pour traiter des volumes initiaux de plasma/sérum allant de 5 ml à 10 ml. La première colonne traitera le grand volume de fluides corporels qui sera suivi d'une concentration sur une mini-colonne pour une élution finale de 25 µl à 50 µl.
Détails
Données justificatives
Figure 1. Le kit micro de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 50 µL, 100 µL et 200 µL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant, et a été comparé au kit du concurrent Q. Deux microlitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans des réactions de qPCR pour évaluer la quantité relative du gène de l'ARNr 5S purifié. La quantité relative du gène de l'ARNr 5S augmente de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Le kit de Norgen a montré la récupération la plus cohérente et la plus élevée du gène d'ARNr 5S d'entretien par rapport à l'autre méthode d'isolement.
Figure 2. Le kit micro de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen est utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 50 µL, 100 µL et 200 µL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux microlitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans les réactions de qPCR pour évaluer la linéarité du gène de l'ARNr 5S purifié à partir des différents volumes de plasma. Le kit micro de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 96 % du gène de l'ARNr 5S à partir de 100 µl de plasma par rapport à la quantité présente dans 50 µl de plasma. En outre, 97 % du gène de l'ARNr 5S a été récupéré à partir de 200 µL de plasma par rapport à la quantité présente dans 100 µL de plasma.
Figure 3. L'ADN a été isolé à partir de 50 µL, 100 µL et 200 µL de plasma à l'aide du Kit micro de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum. Des volumes croissants de l'élution (2, 4 et 8 µL) ont été utilisés dans une réaction qPCR de 20 µL pour observer toute diminution de la valeur Ct. Une augmentation des valeurs Ct avec l'augmentation de la quantité de matrice serait une indication claire de la présence d'inhibiteurs de la PCR dans l'échantillon. Une augmentation du volume d'élution utilisé comme modèle dans la qPCR n'a pas affecté la valeur Ct générée par la qPCR et, en fait, les valeurs Ct ont tendance à diminuer avec l'augmentation du volume d'entrée de la PCR, ce qui indique que l'ADN purifié à partir du plasma à l'aide du kit de Norgen est exempt des inhibiteurs courants généralement présents dans le plasma.
Figure 4. Le kit mini de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 200 µL, 300 µL et 400 µL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant, en comparaison avec les kits du concurrent Q. Deux microlitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans des réactions de qPCR pour évaluer la quantité relative du gène de l'ARNr 5S purifié. La quantité relative du gène de l'ARNr 5S augmente de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Le kit de Norgen a montré la récupération la plus cohérente et la plus élevée du gène d'ARNr 5S d'entretien par rapport à l'autre méthode d'isolement.
Figure 5. Le kit mini de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 200 µL, 300 µL et 400 µL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux microlitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans les réactions de qPCR pour évaluer la linéarité du gène de l'ARNr 5S purifié à partir des différents volumes de plasma. Le mini kit de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 98 % du gène de l'ARNr 5S à partir de 300 µL de plasma par rapport à la quantité présente dans 200 µL de plasma. En outre, 98 % du gène de l'ARNr 5S a été récupéré à partir de 400 µL de plasma par rapport à la quantité présente dans 300 µL de plasma.
Figure 6. L'ADN a été isolé à partir de 200 µL, 300 µL et 400 µL de plasma à l'aide du kit mini de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de Norgen pour le plasma/sérum. Des volumes croissants de l'élution (2, 4 et 8 µL) ont été utilisés dans une réaction qPCR de 20 µL pour observer toute diminution de la valeur Ct. Une augmentation des valeurs Ct avec l'augmentation de la quantité de matrice serait une indication claire de la présence d'inhibiteurs de la PCR dans l'échantillon. Une augmentation du volume d'élution utilisé comme modèle dans la qPCR n'a pas affecté la valeur Ct générée par la qPCR et, en fait, les valeurs Ct ont tendance à diminuer avec l'augmentation du volume d'entrée de la PCR, ce qui indique que l'ADN purifié à partir du plasma à l'aide du kit de Norgen est exempt des inhibiteurs courants généralement présents dans le plasma.
Figure 7.Purification de l'ADN circulant acellulaire à partir de différents volumes de plasma. Le kit Midi de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 0,5 mL, 1 mL, 2 mL et 4 mL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant, en comparaison avec les kits du concurrent Q. Deux microlitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans des réactions de qPCR pour évaluer la quantité relative du gène de l'ARNr 5S purifié. La quantité relative du gène de l'ARNr 5S augmente de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Le kit de Norgen a montré la récupération la plus cohérente et la plus élevée du gène d'ARNr 5S d'entretien par rapport à l'autre méthode d'isolement.
Figure 8. Linéarité de l'ADN purifié à partir de volumes croissants de plasma à l'aide du kit Midi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum. Le kit Midi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 0,5 mL, 1 mL, 2 mL et 4 mL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux microlitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans les réactions de qPCR pour évaluer la linéarité du gène de l'ARNr 5S purifié à partir des différents volumes de plasma. Le kit Midi de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 97 % du gène de l'ARNr 5S à partir de 1 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 0,5 mL de plasma. En outre, 95 % du gène de l'ARNr 5S a été récupéré à partir de 2 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 1 mL de plasma. En outre, 95 % du gène de l'ARNr 5S a été récupéré dans 4 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 2 mL de plasma.
Figure 9. Détermination de la quantité d'inhibition présente dans les échantillons d'ADN circulant sans cellules plasmatiques lors de la détection du gène 5S humain. L'ADN a été isolé à partir de 0,5 mL, 1 mL, 2 mL et 4 mL de plasma à l'aide du kit Midi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum. Des volumes croissants de l'élution (2, 4 et 8 µL) ont été utilisés dans une réaction qPCR de 20 µL afin d'observer toute diminution de la valeur Ct. Une augmentation des valeurs Ct avec l'augmentation de la quantité de matrice serait une indication claire de la présence d'inhibiteurs de la PCR dans l'échantillon. Une augmentation du volume d'élution utilisé comme modèle dans la qPCR n'a pas affecté la valeur Ct générée par la qPCR et, en fait, les valeurs Ct ont tendance à diminuer avec l'augmentation du volume d'entrée de la PCR, ce qui indique que l'ADN purifié à partir du plasma à l'aide du kit Norgen est exempt des inhibiteurs courants généralement présents dans le plasma.
Figure 10. Le kit Maxi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 5 mL, 8 mL et 10 mL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant, en comparaison avec les kits du concurrent Q. Deux millilitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans des réactions de qPCR pour évaluer la quantité relative du gène de l'ARNr 5S purifié. La quantité relative du gène de l'ARNr 5S augmente de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Le kit de Norgen a montré la récupération la plus cohérente et la plus élevée du gène d'ARNr 5S d'entretien par rapport à l'autre méthode d'isolement.
Figure 11. Le kit Maxi de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ADN circulant à partir de 5 mL, 8 mL et 10 mL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux millilitres de l'ADN purifié ont ensuite été utilisés comme matrice dans les réactions de qPCR pour évaluer la linéarité du gène de l'ARNr 5S purifié à partir des différents volumes de plasma. Le kit Maxi de purification de l'ADN circulant sans cellules du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 94 % du gène de l'ARNr 5S à partir de 8 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 5 mL de plasma. En outre, 96 % du gène de l'ARNr 5S a été récupéré à partir de 10 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 10 mL de plasma.
Figure 12. L'ADN a été isolé à partir de 5 mL, 8 mL et 10 mL de plasma à l'aide du kit Maxi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules de plasma/sérum. Des volumes croissants de l'élution (2, 4 et 8 µL) ont été utilisés dans une réaction qPCR de 20 µL afin d'observer toute diminution de la valeur Ct. Une augmentation des valeurs Ct avec l'augmentation de la quantité de matrice serait une indication claire de la présence d'inhibiteurs de la PCR dans l'échantillon. Une augmentation du volume d'élution utilisé comme modèle dans la qPCR n'a pas affecté la valeur Ct générée par la qPCR et, en fait, les valeurs Ct ont tendance à diminuer avec l'augmentation du volume d'entrée de la PCR, ce qui indique que l'ADN purifié à partir du plasma à l'aide du kit de Norgen est exempt des inhibiteurs courants généralement présents dans le plasma
| Spécifications du kit | |
| Entrée minimale de plasma/sérum | 10 μL |
| Entrée maximale de plasma/sérum | 200 μL |
| Taille de l'ADN purifié | ≥ 50 bp |
| Volume d'élution | 25-50 μL |
| Temps nécessaire pour effectuer 10 purifications | 15-20 minutes |
| Rendement moyen* | Variable selon le spécimen |
**Veuillez consulter la page 7 du manuel du produit pour connaître les rendements moyens du plasma/sérum et les méthodes courantes de quantification de l'ADN.
Conditions de stockage et stabilité du produit
Toutes les solutions doivent être maintenues hermétiquement fermées et conservées à température ambiante. Ce kit est stable pendant 2 ans après la date d'expédition. Le kit contient une protéinase K prête à l'emploi, qui est dissoute dans un tampon de stockage spécialement préparé. La protéinase K tamponnée est stable jusqu'à 2 ans après la date d'expédition lorsqu'elle est conservée à température ambiante.
Documentation
(55100) Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits - Protocol (50 Preps)
(55600) Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits - Protocol (20 Preps)
(55800) Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits - Protocol (10 Preps)