Kit de purification de l'ARN total maxi

Aperçu du produit

Le kit Maxi de purification de l'ARN total de Norgen fournit une méthode rapide pour l'isolement et la purification de l'ARN total à partir de cellules animales cultivées, d'échantillons de tissus, de sang, de bactéries, de levures, de champignons, de plantes et de virus. Le kit purifie toutes les tailles d'ARN, du grand ARNm et de l'ARN ribosomal jusqu'au microARN (miARN) et au petit ARN interférent (siARN). L'ARN est préférentiellement purifié des autres composants cellulaires tels que les protéines, sans utilisation de phénol ou de chloroforme. L'ARN purifié est de la plus haute intégrité et peut être utilisé dans un certain nombre d'applications en aval, notamment la PCR en temps réel, la PCR par transcription inverse, le transfert de Northern, la protection par la RNase et l'extension des amorces, ainsi que les essais de réseaux d'expression.

Technologie de purification de Norgen

La purification est basée sur la chromatographie sur colonne de spin utilisant la résine propriétaire de Norgen comme matrice de séparation. L'ARN est préférentiellement purifié des autres composants cellulaires tels que les protéines sans utilisation de phénol ou de chloroforme. Le processus consiste d'abord à lyser les cellules ou le tissu d'intérêt avec le Buffer RL fourni (voir le diagramme de flux à la page 4). L'ADN est ensuite capturé sur une colonne d'élimination de l'ADN génomique. De l'éthanol est ensuite ajouté au flux de l'étape d'élimination de l'ADN et la solution est chargée sur une micro-colonne de purification de l'ARN. La résine de Norgen lie l'ARN d'une manière qui dépend des concentrations ioniques. Ainsi, seul l'ARN se lie à la colonne, tandis que les protéines contaminantes sont éliminées dans le flux ou retenues sur la partie supérieure de la résine. L'ARN lié est ensuite lavé avec la solution de lavage A fournie afin d'éliminer toutes les impuretés restantes, et l'ARN total purifié est élué avec la solution d'élution A. La conception spéciale de la micro-colonne d'essorage permet un petit volume d'élution de seulement 20 μL. L'ARN purifié est de la plus haute intégrité et peut être utilisé dans un certain nombre d'applications en aval.

Détails

Données justificatives

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Figure 1. Isoler une diversité d'espèces d'ARN. L'ARN total a été isolé à partir de 10 mL d'une culture d'E. coli d'une nuit à l'aide du kit Maxi de purification de l'ARN total de Norgen. Un microlitre de l'élution de 2 mL a été analysé sur une puce Agilent® 2100 BioAnalyzer RNA Nano 6000. Comme on peut le constater, un ARN total de haute qualité a été isolé avec une dégradation minimale. En outre, une grande quantité de petits ARN (< 200 nt) a été récupérée, ce qui indique que le kit est capable d'isoler une diversité d'espèces d'ARN.

Figure 2. Bonne amplification et cohérence de l'isolement. Le kit Maxi de purification de l'ARN total de Norgen a été utilisé pour isoler l'ARN total de six échantillons différents d'E. coli prélevés pendant la nuit (échantillons de 10 mL). En bref, un microgramme de l'ARN isolé a été soumis à une transcription inverse de 20 µL à l'aide de Superscript III d'Invitrogen. Trois microlitres de la transcription inverse ont été utilisés comme modèle dans une réaction qPCR de 20 µL utilisant des amorces spécifiques de l'ARNr 16S d'E. coli et le mélange iQ de Bio-Rad. Comme on peut le voir, l'ARN a été détecté et amplifié avec succès dans tous les cas. En outre, tous les échantillons présentaient une valeur Ct similaire, ce qui indique une isolation cohérente.

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