Kits de purificación de exosomas de plasma/suero y aislamiento de ARN
Sistema todo en uno para la purificación de exosomas y el posterior aislamiento de ARN a partir de muestras de plasma/suero.
Kits de purificación de exosomas de plasma/suero y aislamiento de ARN
Sistema todo en uno para la purificación de exosomas y el posterior aislamiento de ARN a partir de muestras de plasma/suero.
Descripción general del producto
Los kits de Norgen para el aislamiento de exosomas en plasma/suero y ARN de circulación libre constituyen sistemas todo en uno para la purificación de exosomas y el aislamiento secuencial de ARN exosomal y ARN de circulación libre a partir de diferentes volúmenes de muestras de plasma/suero. La purificación se basa en la cromatografía en columna centrífuga que emplea la resina patentada de Norgen. Estos kits están diseñados para aislar todos los tamaños de ARN, incluido el microARN, independientemente de su tamaño o contenido de GC, sin sesgos. Estos kits ofrecen una clara ventaja sobre otros kits disponibles, ya que no requieren instrumentación especial, reactivos de precipitación de proteínas, tubos de extensión, tratamientos con fenol/cloroformo o proteasas. El ARN aislado de los exosomas purificados está libre de cualquier ARN circulante unido a proteínas y es de la máxima integridad. El ARN purificado puede utilizarse en una serie de aplicaciones posteriores, como PCR en tiempo real, PCR de transcripción inversa, Northern blot, protección contra RNasas y extensión de cebadores, así como en ensayos de arrays de expresión.
Detalles
Datos de respaldo
Figura 1. Aislamiento de ARN a partir de exosomas purificados de diferentes volúmenes de plasma. Se utilizó el kit de purificación de exosomas de plasma/suero y aislamiento de ARN Mini de Norgen (Cat# 58300) para aislar ARN de exosomas purificados de diferentes volúmenes de plasma utilizando el mismo kit. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ARN aislado como molde en reacciones de RT-qPCR para evaluar la amplificación del miR-26a exosomal plasmático aislado. (A) El miR-26a exosomal plasmático disminuye linealmente al aumentar el volumen de entrada de la muestra. (B) La cantidad relativa del miR-26a exosomal plasmático muestra una excelente linealidad con un porcentaje de recuperación superior al 90%.
Figura 2. Los exosomas intactos se purificaron a partir de 1 mL de plasma utilizando diferentes métodos de purificación. Los exosomas intactos se purificaron a partir de 1 mL de plasma utilizando el Mini Kit de Purificación de Exosomas y Aislamiento de ARN en Plasma/Suero de Norgen (Cat# 58300), el kit del Competidor S y el kit del Competidor L (a partir de plasma). Los exosomas purificados con el kit de Norgen se resuspendieron en 200 µl de tampón ExoR de Norgen, se diluyeron 1:1.000 y se visualizaron en el instrumento NanoSight LM10. El análisis muestra que el kit de Norgen aisló exosomas de 55 nm con una recuperación de 9,64 x 1013 partículas/mL de plasma. No se encontraron impurezas que contaminaran los exosomas purificados utilizando el kit de purificación de exosomas de plasma/suero y aislamiento de ARN de Norgen. Además, a partir de 1 mL de plasma se purificaron exosomas con un rango de tamaño más amplio que abarcaba de 50 nm a 150 nm con una concentración más alta en comparación con los otros dos métodos.
Figura 3. Exosomas intactos purificados a partir de 1 mL y 10 mL de plasma. Los exosomas intactos se purificaron a partir de 1 mL de plasma utilizando el Kit de Purificación de Exosomas y Aislamiento de ARN en Plasma/Suero Mini de Norgen (Cat# 58300) y a partir de 10 mL de plasma utilizando el Maxi Kit de Purificación de Exosomas y Aislamiento de ARN en Plasma/Suero de Norgen (Cat# 58600). Los exosomas purificados con el kit mini de Norgen se resuspendieron en 200 µl de tampón ExoR de Norgen, mientras que los purificados con el kit Maxi de Norgen se resuspendieron en 600 µl de tampón ExoR de Norgen, se diluyeron 1:1.000 y se visualizaron en el instrumento NanoSight LM10. El análisis muestra que la purificación de los exosomas es lineal, ya que se recuperaron 4,04 x 1010 partículas/mL a partir de 1 mL de plasma, mientras que se recuperaron 2,95 x 1011 partículas/mL a partir de 10 mL de plasma.
Figura 4. Aislamiento de ARN a partir de exosomas purificados de diferentes volúmenes de plasma. Se utilizó el Kit de Purificación de Exosomas de Plasma/Suero y Aislamiento de ARN Midi de Norgen (Cat# 58500) para aislar ARN de exosomas purificados de diferentes volúmenes de plasma utilizando el mismo kit. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ARN aislado como molde en reacciones de RT-qPCR para evaluar la amplificación del miR-26a exosomal plasmático aislado. (A) El miR-26a exosomal plasmático disminuye linealmente con el aumento del volumen de entrada de la muestra. B) La cantidad relativa del miR-26a exosomal plasmático muestra una excelente linealidad con un porcentaje de recuperación superior al 90%.
Figura 5. Los exosomas intactos se purificaron a partir de 1 mL de plasma utilizando diferentes métodos de purificación. Los exosomas intactos se purificaron a partir de 1 mL de plasma utilizando el Kit de purificación de exosomas de plasma/suero y aislamiento de ARN Mini de Norgen (Cat# 58300), el kit del Competidor S y el kit del Competidor L (a partir de plasma). Los exosomas purificados con el kit Norgens se resuspendieron en 200 µl de tampón ExoR de Norgen, se diluyeron 1:1.000 y se visualizaron en el instrumento NanoSight LM10. El análisis muestra que el kit de Norgen aisló exosomas de 55 nm con una recuperación de 9,64 x 10^13 partículas/mL de plasma. No se encontraron impurezas que contaminaran los exosomas purificados utilizando el Mini Kit de Purificación de Exosomas y Aislamiento de ARN de Plasma/Suero de Norgen. Además, a partir de 1 mL de plasma se purificaron exosomas con un rango de tamaño más amplio, de 50 nm a 150 nm, con una concentración más alta en comparación con los otros dos métodos.
Figura 6. Exosomas intactos purificados a partir de 1 mL y 10 mL de plasma. Los exosomas intactos se purificaron a partir de 1 mL de plasma utilizando el Kit de Purificación de Exosomas y Aislamiento de ARN de Plasma/Suero Mini de Norgen (Cat# 58300) y a partir de 10 mL de plasma utilizando el Kit de Purificación de Exosomas y Aislamiento de ARN de Plasma/Suero Maxi de Norgen (Cat# 58600). Los exosomas purificados con el kit Mini de Norgen se resuspendieron en 200 µl de tampón ExoR de Norgen, mientras que los purificados con el kit Maxi de Norgen se resuspendieron en 600 µl de tampón ExoR de Norgen, se diluyeron 1:1.000 y se visualizaron en el instrumento NanoSight LM10. El análisis muestra que la purificación de los exosomas es lineal, ya que se recuperaron 4,04 x 10^10 partículas/mL a partir de 1 mL de plasma, mientras que se recuperaron 2,95 x 10^11 partículas/mL a partir de 10 mL de plasma.
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Especificaciones del kit
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| Entrada mínima de plasma/suero |
50 μL
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Entrada máxima de plasma/suero
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1 mL
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Tamaño de los exosomas purificados
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40 nm - 150 nm
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| Tamaño del ARN purificado | Todos los tamaños, incluidos miARN y ARN pequeños (< 200 nt) |
| Volumen de elución | 50-100 μL |
| Tiempo para completar 10 purificaciones |
35 - 40 minutos
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| Rendimiento medio* | Variable en función de la muestra |
*por favor, consulte la página 4 del prospecto del producto para conocer los rendimientos medios y los métodos comunes de cuantificación del ARN.
Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 2 años a partir de la fecha de envío. Se recomienda calentar el tampón de lisis A durante 20 minutos a 60°C si se observa precipitación de sales.
Nota importante
Este kit es adecuado para la purificación de exosomas a partir de suero fresco o congelado o plasma preparado a partir de sangre extraída con EDTA o citrato. No deben utilizarse muestras de plasma preparadas a partir de sangre extraída con heparina, ya que la heparina puede interferir significativamente con muchas aplicaciones posteriores, como la RT-PCR.