概述

Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管是一种密闭的抽空塑料管，用于在储存和运输过程中采集和保存人体全血样本中的 cf-DNA、循环肿瘤 DNA、cf-RNA 和循环肿瘤细胞。将这些试管与 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化试剂盒或 Norgen 的血浆/血清 RNA 纯化试剂盒结合使用，可在极小的洗脱体积内纯化和浓缩无抑制剂的 cf-DNA/ct-DNA/cf-RNA。从 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中回收的血浆也可用于任何其他 cf-DNA 和/或 cf-RNA 纯化方法。纯化的 cf-DNA、ct-DNA 和 cf-RNA 与任何下游应用检测兼容，包括 PCR、qPCR、rt-qPCR、甲基化敏感 PCR、Southern 印迹分析、基因表达分析、微阵列和 NGS。

本产品仅供研究使用，不得用于诊断程序。

性能

Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管简化了全血的采集/处理过程，以便随后纯化 cf-DNA 和/或 cf-RNA。cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管能保存和抑制血液中的细胞程序性死亡（凋亡），从而防止细胞内 DNA/RNA 释放到血浆中。全血样本可在室温下运输和储存，以便随后处理血浆。cf/ct DNA 和 cf-RNA 水平在室温下可稳定长达 30 天。cf-DNA 在 37°C 温度下也可稳定保存 8 天。用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 管采集的血液在进行血浆回收处理时，不会生成缓冲衣，循环肿瘤细胞 (CTC) 将与血液沉淀物一起位于管底。CTC 在室温下可稳定 14 天，可从血液沉淀物或保存的全血中提取，用于细胞分拣或 cf/DNA 或 cf-RNA 纯化。

从采集到 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中的全血样本中提取血浆样本，然后使用 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化试剂盒或 Norgen 的血浆/血清 RNA 纯化试剂盒进行纯化，即可获得浓缩的、优质、无抑制剂的 cf-DNA/ct-DNA 或 cf-RNA，可用于任何下游应用。

细节

支持数据

图 1.环境温度储存对 cf-DNA (pDNA) 和基因组 DNA (gDNA) 的影响，前者以短 Alu（115bp）片段为例，后者以大 Alu（247bp）片段为例。抽取的血液样本分为两种：1) EDTA 管，2) 竞争对手试管或 3) Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管，室温保存。在指定时间抽取等量血液并分离血浆。分离出 DNA，使用代表 pDNA 的短 ALU 基因靶标（115 bp）和代表 gDNA 的长 ALU 基因（247 bp），通过实时聚合酶链式反应测定 pDNA 和 gDNA 的浓度。这两个片段的水平应在持续时间内保持不变，表明病情稳定，不会发生溶血。不出所料，在 EDTA 管中，cf-DNA 没有稳定，而且出现了大量溶血。14 天后，竞争产品显示这两种基因的 Ct 值明显降低，而 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在室温下可稳定保存 30 天。

图 2.运输后血浆容量不会损失。从 6 名不同的献血者身上抽血，一式两份。一套保存在室温下的实验室中，另一套装在保温箱中，通过隔夜空运从安大略省索罗尔德市运往密歇根州温尼伯市，然后再运回安大略省索罗尔德市（经过 72 小时）。回国后，保存的样本在室温下存放 7 天，然后再分离血浆。从 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中回收的血浆量在运输前和运输后都没有变化（6-7 mL 回收血浆）。对于竞争对手试管和 EDTA 试管，运输前回收的血浆量约为 4 mL，运输后回收的血浆量约为 2.5 mL。

图 3.随时间测量采集血液的溶血情况。血液样本被抽取到1) EDTA 管；2) 竞争对手试管；3) Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管，并可保存 30 天。溶血是通过测量 3 名受试者血浆中游离血红蛋白在 414 nm 波长下的吸收率来确定的。显示的是平均吸收率。EDTA 管和竞争对手试管中的游离血红蛋白量每增加一天就会迅速增加，而 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中的游离血红蛋白量则保持相对稳定。

图 4.防止细胞裂解、gDNA 释放和血浆中凋亡梯的积累。将抽取的血样放入三种不同的试管（Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管、EDTA 和竞争对手试管）中，并保存长达 30 天。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管有助于防止高分子量 gDNA 释放到血浆中，同时最大限度地减少外周血白细胞凋亡产生的污染性凋亡梯的积累。如黑色圆圈所示，与竞争对手试管和 EDTA 试管相比，gDNA 污染水平非常低。这表明细胞裂解程度很低，随后 gDNA 释放到保存的血浆样本中。

图 5.高温（37°C）储存 8 天的影响。将血样抽取到 EDTA 管、竞争对手管或 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管中并储存在 37°C 下。然后从处理后的血浆中分离出 cf-DNA。使用长 ALU 基因靶标 (247 bp) 通过实时聚合酶链式反应测定 gDNA 浓度。EDTA 管中的 gDNA - 目标物在 37°C 下储存 1 天后，Ct.值较初始时间点明显下降，并持续下降至第 8 天。对于竞争对手，gDNA - 目标物在储存第 4 天前保持稳定，然后 Ct 值开始显著下降，表明第 4 天后稳定性较差。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管可使样本稳定 8 天。

图 6.使用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管保存血浆中的大量 cf-DNA。将同一供血者的血液样本抽入竞争对手试管或 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中，并在室温下保存 7 天。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管回收了 6.5 mL 血浆，而竞争对手的试管回收了 3.5 mL 血浆。然后使用 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒（类别号：55600）和 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒（类别号：55800）。使用安捷伦生物分析仪高灵敏度 DNA 芯片对从两种样本中回收的 DNA 数量进行了评估。从生物分析仪的检测结果可以看出，与从竞争对手的保存剂试管中回收的 cf-DNA 相比，Norgen 的保存剂试管产生了更多的 cf-DNA（蓝色峰值）。

图 7.环境温度储存对 cf-RNA 的影响，以 18S rRNA 转录本、HPRT1 mRNA 转录本和 miR-21 为例。抽取的血液样本分为两种：1) 竞争对手试管或 2) Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管。竞争对手的试管在室温下可保存 14 天，而 Norgens cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在室温下可保存 30 天。在指定时间处理每个试管并分离血浆。分离出 Cf-RNA，并通过针对 18S rRNA 转录本、HPRT1 mRNA 转录本和 miR-21 的 rt-qPCR 扩增测定纯化的 cf-RNA 的稳定性。这三个目标的水平应在稳定期间保持不变。7 天后，竞争对手的三个靶标的 Ct 值明显升高，表明 cf-RNA 降解，而 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管在室温条件下，cf-RNA 可稳定 30 天。

图 8.环境温度储存对血浆蛋白保存 30 天的影响。血液样本被抽入 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂试管中，并在室温下保存 30 天。在指定的时间，对每个管进行血浆回收处理，并使用 Norgens ProteoSpin™ 丰富血清蛋白去除试剂盒（类别号：17300）从 50 µL 血浆中纯化蛋白质。在 12% SDS-PAGE 凝胶上对纯化的 A) 贫血血浆蛋白和 B) 高丰度血浆蛋白的稳定性进行了评估。在环境温度下，耗竭的血浆蛋白和高含量的血浆蛋白都能稳定地保存 30 天，没有任何蛋白质降解的迹象。

试剂盒规格
管径	16 x 100 毫米
管型	PET 管
抽血量	8.7 ml 管装 10 ml
保存剂容量	1.3 mL
回收血浆量	约 6-7 ml （不受运输影响）
抗凝剂	专利
保存剂	无甲醛 - 专有保存
cf-DNA 保存期限	室温（15-25°C）下长达 30 天， 37°C 下长达 8 天
cf-RNA 保存期限	室温（15-25°C）下长达 30 天
四氯化碳保存期	室温（15-25°C）下长达 14 天