RNA 清理和浓缩试剂盒

图 2.有效清理，生成与生物分析仪分析兼容的优质总 RNA。使用竞争对手的苯酚基 RNA 提取试剂从 0.75 万个 HeLa 细胞中分离出总 RNA。然后使用 Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒纯化得到的 RNA。作为对照，使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒（17200，无需酚）或仅使用酚基 RNA 提取试剂提取总 RNA，无需净化。在 Agilent RNA Nano 6000 芯片上对 50 µL 纯化 RNA 中的 1 µL 进行分辨后发现，使用苯酚基 RNA 提取试剂分离的 RNA 样本在生物分析仪上的分辨能力很差。相比之下，用酚基 RNA 提取试剂提取的 RNA 经 Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒清理后，能在生物分析仪上正常解析，显示出极佳的质量。

图 3.有效浓缩和检测低量 RNA 输入。Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒可有效浓缩一皮克范围内的 RNA 输入。使用 Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒将输入体积为 50 µL 的 HeLa RNA 浓缩至 20 µL。然后，在检测 S14 基因的 qRT-聚合酶链式反应中，用 10 µL 等分纯化的 RNA 作为模板。图中所示的量与 qRT-聚合酶链式反应中输入的 RNA 量一致，表明即使在皮克范围内，试剂盒的性能也是一致的。

图 4.Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒可有效清理 RNA 转录本，并实现高回收率。使用 Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒生成了三种不同大小（分别为 266n、161n 和 419n）的 RNA 转录本（1-3）。然后使用 Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒纯化得到的 RNA 转录本。在 1X MOPS、1.5% 甲醛-琼脂糖凝胶上分辨 7.5 µL 的 50 µL 清洁 RNA (C) 和等体积的未清洁输入 RNA (I)，结果显示 Norgen 的 RNA 清洁和浓缩试剂盒成功清洁了 RNA 转录本。

图 5.有效清理，生成与生物分析仪分析兼容的优质 RNA 转录本。Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒可有效清理 RNA 转录本，且回收率高。使用 Norgen 的 RNA 清理和浓缩试剂盒生成了三种不同大小（分别为 266n、161n 和 419n）的 RNA 转录本（1-3）。在 Agilent RNA Nano 6000 芯片上分辨 1 µL 的 50 µL 清洁 RNA 转录本显示，经 Norgen 的 RNA 清洁和浓缩试剂盒清洁的 RNA 转录本在生物分析仪上分辨正常，显示出极佳的质量。

图 6.浓缩核糖核酸质量上乘。使用 RNA 清理和浓缩 Micro-Elute 试剂盒将从 HeLa 细胞中分离出的总 RNA（2 µg）浓缩至 8 µL。使用 Agilent 2100 生物分析仪生成的电泳图（RIN > 9）显示了其卓越的质量。浓缩后的 RNA 是真正的“总 RNA”，这一点可以通过小 RNA 的存在观察到。

图 7.浓缩 RNA 的高回收率。从 HeLa 细胞中分离出的总 RNA（17.5 µL）使用 RNA 清理和浓缩 Micro-Elute 试剂盒浓缩至 8 µL，结果 RNA 浓度增加了 2-2.2 倍，这是用 Agilent 2100 生物分析仪定量测量的结果。

图 8.总 RNA 的浓度。使用 RNA 清理和浓缩 Micro-Elute 试剂盒浓缩指定量的 HeLa RNA。对于每个输入量，处理 17.5 µL 的体积，用 8 µL 洗脱 RNA，从而得到 2.2 倍的浓度。每种洗脱液取 3µL，与寡聚-dT 引物一起用于 10 µL RT 反应，然后使用 3 µL 产生的 cDNA 和人类 RPS15 基因的特异性引物进行实时聚合酶链式反应。平均而言，浓缩 RNA 的扩增比输入 RNA 样本早达到 1 Ct 的阈值，这是根据浓缩因子预计的。使用的最低输入量（240 pg）只有在浓缩时才会扩增（图中最右侧的样本）。

图 9.miRNA 的浓度。使用 RNA 清理和浓缩 Micro-Elute 试剂盒浓缩指定量的 HeLa RNA。在使用 miR-21-SLR 引物的 10 µL RT 反应中，每 8 µL 洗脱液使用 3 µL，然后使用 3 µL 产生的 cDNA 和 miR-21 特异性前向引物进行实时聚合酶链式反应。

图 10.下一代测序 (NGS) 应用前的 RNA 浓缩。使用 Norgen 总 RNA 纯化试剂盒（类别号：17200），从 EDTA 血液试管中采集的 200 µL 血浆中纯化总 RNA，并用 50 µL 的洗脱液进行洗脱。同样的 RNA 也使用 Micro-Elute RNA 柱浓缩了两倍，用 25 µL 的洗脱液进行洗脱。使用用于 Illumina® 的 NEBNext® Small RNA 文库制备套装，按照制造商的说明，将 5 μL 未额外浓缩的 RNA 和 2 倍浓缩的 RNA 作为输入，在 MiSeq（Illumina）平台上生成用于小 RNA NGS 的 RNA 文库。A) 在 6% TBE 聚丙烯酰胺凝胶上观察制备的小 RNA 文库，与未浓缩的 RNA 相比，用 2X 浓缩 RNA 制备的文库含有更多的连接/索引 miRNA cDNA（147-160 bp）产物。B) 从切除的凝胶条带中提取 cDNA，并使用 Agilent 2100 生物分析仪（高灵敏度 DNA 检测）进行检测。正如输入所预期的那样，用 2 倍浓缩的 RNA 样本制备的小 RNA 文库比未经事先浓缩的 RNA 文库浓缩约两倍（分别为 39.8 对 21.2 nM）。